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莽草酸的作用（一） |
发布单位：嘉迪欧公司 发布时间：2007-3-6 17:09:28阅读：985次 |
摘要 目的：研究三乙酰莽草酸（TSA）对血小板聚集功能的抑制作用及其作用机理。方法：用比浊法测定血小板聚集功能，分光光度法测定MDA的含量，放免法测定TXB2，6-酮-PGF1α， cAMP和cGMP的含量。结果：TSA 12.5，25，50，100和200 mg.kg-1 ig明显抑制ADP和胶原诱导的大鼠血小板聚集；TSA 12.5，50和200 mg.kg-1 ig显著增加大鼠血小板内cAMP水平，但不影响cGMP水平。TSA 200 mg.kg-1对AA诱导的血小板中MDA的生成，ADP诱导的血小板中TXB2和腹主动脉壁6-酮-PGF1α的生成有轻度抑制作用。结论：TSA抑制血小板聚集作用部分与血小板内cAMP水平升高有关。
关键词 三乙酰莽草酸； 血小板聚集； 血栓素B2； 6-酮-PGF1α
INHIBITORY EFFECTS OF TRIACETYLSHIKIMIC ACID ON PLATELET AGGREGATION
Huang Fengyang(Huang FY), Xu Qiuping(Xu QP), Sun Jianning(Sun JN) and Guo Yajian(Guo YJ)
(Department of Pharmacology, Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)
ABSTRACT AIM: To study the inhibitory effects of triacetylshikimic acid (TSA) on rat platelet aggregation and its mechanism. METHODS: Light transmission was used to measure platelet aggregation. Methods of spectrophotometry and radioimmunoassay were used to measure the levels of malondialdehyde(MDA), thromboxane B2(TXB2), 6-keto-PGF1α, cAMP and cGMP.RESULTS: TSA 12.5, 25,50,100 and 200 mg.kg-1.d-1 ig for 3 d inhibited the rat platelet aggregation induced by ADP and collagen. TSA 12.5, 50 and 200 mg.kg-1 markedly increased the cAMP level and exhibited no effect on the cGMP level in rat platelets. TSA 200 mg.kg-1 was shown to slightly inhibit AA-induced MDA generation and ADP-induced TXB2 formation in rat platelets, and to slightly suppress 6-keto-PGF1α generation from the abdominal aortae. CONCLUSION: TSA was found to be a potent inhibitor of platelet aggregation, which was partially concerned with the elevation of cAMP in platelets.
KEY WORDS triacetylshikimic acid; platelet aggregation; thromboxane B2; 6-keto-prostaglandin F1α
三乙酰莽草酸（triacetylshikimic acid，TSA）是以莽草酸（shikimic acid，SA）为母核人工半合成的新化合物。SA是由木兰科植物八角茴香中提取的有效成分，本室以前工作证明，SA有抑制血小板聚集和抗实验性血栓形成作用，但是SA 极性较大，po不易吸收，只宜iv，因而限制了SA的使用［1］。TSA较SA的极性小，脂溶性增大，易通过生物膜。为了研究TSA的药理作用，本文观察了TSA对大鼠血小板聚集性的影响，并对其作用机理进行了初步的探讨。
材料与方法
药品与试剂 TSA由本校植化教研室郭亚健教授提供，加1%吐温-80助溶后，用0.5%羧甲基纤维素钠（CMC）制备成混悬液；二磷酸腺苷（ADP），花生四烯酸（AA）为Sigma公司产品；胶原溶液用大鼠尾部皮肤自制；阿斯匹林（acetylsalicylic acid, ASA）为无锡Astra公司产品；丙二醛（MDA）试剂盒由邦定生物技术公司提供；125I-TXB2，125I-6-酮-PGF1α放免试剂盒由东亚免疫技术研究所提供。
动物 体重(265±33) g Wistar大鼠，♂，由中国医学科学院动物研究所繁育场提供。
体内给药血小板聚集实验 实验用大鼠70只，随机分为7组，分别ig给予溶媒（对照组）、ASA 100 mg.kg-1和不同剂量的TSA，连续给药3 d，于末次给药1.5 h后，颈总动脉取血，3.8%枸橼酸钠抗凝（体积比为9∶1）。以100×g离心10 min，制备富血小板血浆（PRP），剩余血浆以1200×g离心10 min制备贫血小板血浆（PPP），用PPP调PRP中血小板数为4×108.ml-1，以ADP 10 μmol.L-1，胶原5 g.L-1或AA 200 μmol.L-1诱导血小板聚集，按Born［2］比浊法测定聚集率，测定均在取血后3 h内完成。
血小板MDA测定 按文献［3］方法略加修改。取大鼠 PRP 200 μl于比浊管内，37℃预温2 min，加入AA 200 μmol.L-1，诱导血小板聚集，37℃反应5 min后，再温育1 min，加入冰冷的等体积的20%三氯醋酸-盐酸溶液终止反应。于4℃放置30 min后1200×g离心15 min，取上清液0.15 ml加至含有TBA溶液的试管中，混匀，煮沸1 h，冷却后1200×g离心15 min，于λ532 nm处比色测定其吸光度，计算MDA含量。
血小板TXB2的测定［4］ 取PRP 200 μl于37℃温育5 min后，以ADP（10 μmol.L-1）诱导血小板聚集5 min，停止聚集后1 min，迅速加入10% 消炎痛EDTA.Na2 10 μl，置冰浴中终止反应，聚集后的PRP以1200×g离心10 min，取上清液-20℃保存。用放免法测定TXB2的含量。
腹主动脉壁6-酮-PGF1α的测定［5］ 大鼠放血后，立即开腹取出腹主动脉2～4 cm，以NS洗去残余血液，迅速称重，置-20℃保存。测定前以无水乙醇0.1 ml和NS 0.9 ml匀浆，4℃ 1800×g离心15 min，取上清液用放免法测定6-酮-PGF1α的含量。
血浆中TXB2和6-酮-PGF1α的测定 取大鼠颈总动脉血，以10%消炎痛EDTA.Na2抗凝，于4℃ 1800×g离心15 min，取上清液-20℃保存。用放免法测定TXB2和6-酮-PGF1α含量。
血小板环核苷酸cAMP和cGMP的测定［6,7］ 大鼠以乌拉坦1 g.kg-1 ip麻醉,颈总动脉放血, 2% EDTA.Na2抗凝，以100×g离心15 min, 沉淀物为所需血小板样品。沉淀物中加入0.3% NaCl 溶液1.5 ml，保存2 min，使残留的红细胞溶解，再加入4.5% NaCl 0.25 ml恢复等渗，1800×g离心10 min，弃上清液，沉淀物加入双蒸水0.5 ml和10%三氯醋酸0.25 ml，用硅化玻璃棒轻轻搅拌，置冰浴中15 min，1800×g离心10 min。上清液用水饱和乙醚6 ml分3次提取上清液中三氯醋酸，将水层置60℃水浴10 min，蒸去残余乙醚，-20℃保存。按放免法测定血小板环核苷酸cAMP和cGMP的含量。 |
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